轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒

一、產(chǎn)品介紹

Bt Cry2A轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒用特異性抗 Cry2A 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry2A 單抗，雙抗體夾心法檢測 Cry2A 基因表達產(chǎn)物，可以高靈敏度和特異性來檢測轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。

二、產(chǎn)品編號

規(guī)格：96孔

檢測樣本：種子/葉片

檢測時間：約2小時

有效期：12個月

儲存條件：2℃～8℃避光保存，切勿冷凍

三、檢測原理

轉(zhuǎn)基因檢測試劑盒用特異性抗 Cry2A 單抗包被的微孔板和酶標(biāo)記抗 Cry2A 單抗，雙抗體夾心法檢測 Cry2A 基因表達產(chǎn)物，可以高靈敏度和特異性的檢測轉(zhuǎn)基因植物中的 Bt-Cry2A 蛋白。

四、試劑盒組份（規(guī)格）

預(yù)包被板（抗 Cry2A 單抗）      12 孔×8

Cry2A 酶標(biāo)抗體                        12 ml×1 瓶

20×濃縮洗滌液                         30 ml×1 瓶

5×抽提液/稀釋緩沖液               30 ml×1 瓶

底物液 A                                   7 ml×1 瓶

底物液 B                                   7 ml×1 瓶

終止液                                      7 ml×1 瓶

使用說明書                               1 份

0ppb 陰性對照                         1ml

3 個不同濃度的標(biāo)樣：

1 ppb， 5 ppb，10 ppb          各 1ml

五、試劑準(zhǔn)備

試劑盒中的 20×濃縮洗滌液 30 ml 加 570 ml 滅菌 ddH2O 溶解稀釋至 1×洗滌液，5×抽提液（30 ml）加 120 ml ddH2O 稀釋至 1×抽提液，4 ℃存放備用。

六、樣品準(zhǔn)備

稱取約 20 mg 葉片，加 0.5 ml 1×抽提液（使用前 30 min 放置室溫）研磨至勻漿，室溫放置 30 min，測定前把樣品上清液稀釋 5-20 倍。

測定莖干和胚乳中的 Bt 蛋白時，樣品稱取約 40 mg，加 1ml 1×抽提液研磨。

七、ELISA 反應(yīng)

1. 依次加 100 μl 陰性對照，標(biāo)準(zhǔn)品（3 個不同濃度的標(biāo)樣： 1 ppb， 5 ppb，10ppb）和待測樣品至 96 孔板；

2. 用封口膜蓋住 96 孔板，快速搖動平板混勻樣品；

3. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；

4. 倒掉 96 孔板中液體，用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板，漂洗 5 次，用吸水紙拍干；

5. 按順序在每個小孔中加入 100 μl Cry2A-酶標(biāo)抗體，然后重復(fù)步驟 2；

6. 37 ℃恒溫箱孵育 30 min；

7. 倒掉 96 孔板中液體，用 1×洗滌液每孔 250 μl 洗滌微孔板，漂洗 5 次，用吸水紙拍干；

8. 依次加入 50 μl 底物 A 液，50 μl 底物 B 液，重復(fù)步驟 2；

9. 37℃恒溫箱孵育 10 min，加 50μl 終止液，充分混勻終止反應(yīng)，15 min 以內(nèi)在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。在 450 nm 為主波長，630 nm 為次波長（或單波長 450 nm）下，用空白孔校零，再讀取各孔 OD 值。

八、操作注意事項

1. 測定中需使用的所有試劑和 96 孔板提前 30 min 放置室溫溫育（否則會影響試驗準(zhǔn)確性），注意 12 連管必須溫育后再從平板上取下，未使用完的預(yù)包被板條應(yīng)置于有干燥劑的封口袋中密封保存；

2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻；

3. 搖動平板混勻時注意避免樣品之間交叉污染；

4. 使用洗滌液漂洗時，洗滌液需要填滿每個小孔，進行充分漂洗；

5. 研磨好的樣品如果不能一次全部測量，可以暫時在 4 ℃避光保存，但是最好在 24 h 內(nèi)測定；

6. 結(jié)果判讀請在反應(yīng)終止后 15 min 內(nèi)完成。

九、Bt 蛋白濃度計算公式

Bt 蛋白濃度（μg/g）=

十、轉(zhuǎn)基因試劑盒儲存條件及有效期

試劑盒儲存于 2-8℃，切勿凍存；未開封試劑盒有效期 12 個月，開封后 3 個月內(nèi)用完。（見包裝盒上標(biāo)簽有效期）

十一、轉(zhuǎn)基因試劑盒技術(shù)參數(shù)

本品適用于玉米、棉花、大豆以及其各種農(nóng)作物中轉(zhuǎn)基因成分的快速定性測試。

更新日期：2023-12-8